【产品简介】

高效细胞转染试剂是新型核酸转染试剂。经30余种细胞测试，完美适配 DNA、mRNA及siRNA的高效细胞转染需求，并且血清和抗生素兼容，有利于维持细胞的最佳状态。

本产品使用非常简便，无需对转染试剂进行稀释：可将计算量转染试剂直接加入到核酸稀释液中，孵育10-15分钟即可加样。

本产品为无菌溶液。适用范围：大多数常规细胞、难转染细胞、原核细胞及干细胞的转染。 

【使用说明】

1. 细胞铺板（铺板前，细胞须处于良好生长状态），待其细胞融合度达60-80%时，开始转8小时后，可通过荧光显微镜、流式细胞仪、Western Blot 、ELISA法或报告基因检测法对转染效果染工作；

2. 细胞换液（仅针对前一晚铺板、次日转染；若当天铺板、转染可无需换液），使用等体积新鲜完全培养基置换部分细胞原有上清（正常含血清和抗生素的完全培养基）；

3. 参考表1或表2，使用Optimal-MEM培养基稀释DNA/mRNA或 siRNA，移液枪轻轻吹打混匀，得到核酸稀释液；

4. 随后，直接向核酸稀释液中加入计算量的转染试剂（无需Optimal-MEM再稀释），移液枪轻轻吹打混匀；

5. 室温静置孵育10-15分钟，即可得到转染试剂/核酸复合物；

6. 将转染试剂/核酸复合物逐滴加至细胞上清，轻摇混匀；

7. 继续培养约12-48小时后，可通过荧光显微镜、流式细胞仪、Western Blot 、ELISA法或报告基因检测法对转染效果进行表征。

表1、不同细胞培养器皿中DNA或mRNA及转染试剂用量参考表（仅供参考）

表2、不同细胞培养器皿中siRNA及转染试剂用量参考表（仅供参考）

【储存条件及保质期】 

储存条件：-20℃ , 一年有效。 

                 2~8℃保存,5个月有效；-80℃保存，24个月有效

 建议第一次使用时按照每次实验所需量进行分装保存。 

【注意事项】

 1. 本产品的推荐用量：①DNA或mRNA：DNA或mRNA/转染试剂=1:4 (μg/μL） ，但转染试剂使用量受细 胞类型及其他实验因素影响，建议初次使用时可固定核酸用量（如：96孔板，推荐       100ng） ，在DNA 或 mRNA/转染试剂= 1:0.5~ 1:7 (μg/μL） 的范围内，设置转染试剂用量梯度，以筛选出最佳转染用 量。② siRNA：在正式实验前，建议通过转染荧光修饰siRNA 、流式或荧光显微镜考察细胞siRNA摄 取量来确定 合适的转染试剂/siRNA比例以及siRNA用量，因为有效的细胞内siRNA摄取是siRNA高效敲 低目标蛋白的关键前提。 

2. DNA或mRNA的初始储备浓度宜控制在0.5-5μg/μL范围内；siRNA的推荐浓度为15μM ，但仍需根据目 标靶点的敲减难易程度，在10-50μM范围内进行微调；调整时，转染试剂与siRNA的用量比例尽量保 持不变。 

3. 细胞生长状态非常影响转染效率！请务必选择传代次数相对较少、且生长状态良好的细胞开展相关实 验！

 4. 细胞培养基的pH值偏低（颜色偏黄），会显著影响转染效果；如若此时不好完全换液，可选择半数换 液法：即吸走一半上清，补加一半完全培养基。 

5. 建议在首次实验时，先于96孔板内摸索、确定最优核酸/转染试剂比例，之后再于大体系中开展实验。

 6. 个别细胞（如HeLa 、A549 、THP-1 、CHO-K1 、HEK 293T等）比较敏感，会因单位细胞DNA摄入量过 高而产生DNA毒性（非转染试剂原因）；此时，可通过提高细胞密度，或降低DNA使用量，或在转染 6h 后换液等操作，来降低单位细胞DNA摄入量以降低DNA毒性；同时，选择在转染后12-24小时内对细胞 进 行检测处理。mRNA转染无此问题。若上述方法仍无法改善，建议更换新细胞（前期测试中遇到过3次 以 上细胞问题导致难转染），或检测细胞是否有支原体等微生物感染并加以清除后再开展实验。 

7. 经测试，本产品在室温放置1周后，仍能保持良好转染效果。 

8. 本产品为无菌包装，无需过滤，请注意无菌取用。 

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

【声明】

 本产品仅用于研究用途，不适用于人类、治疗或诊断应用

【产品说明书下载】

Highly Efficient Gene Transfection Reagent高效细胞转染试剂#KT0152